γ-干扰素释放试验（QFT）

从一例疑难感染说起：为何精准诊断

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李某某，男性，52岁，因“反复发热、咳嗽、乏力2月余”。期间曾于多家医院就诊，经验性使用多种广谱抗菌药物，症状一度缓解后再次加重，出现盗汗、体重明显下降。胸部影像学提示双肺多发斑片、结节影，常规痰涂片及反复阴性。迁延，不明，临床抗感染治疗僵局，急需一种高灵敏度的检测方法来查明潜在的体，特别是需要排除或确认活动性结核。这个揭示了在感染，结核诊断中，传统方法面临的局限与挑战。

1. 项目介绍：传统局限、技术突破与中国感染现状

传统诊断的困境：结核实验室诊断长期依赖痰涂片镜检和固体。涂片法灵敏度低，且无法区分结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌；法虽是“金标准”，但耗时长，通常需要2-8周，极易延误治疗。对于肺外结核、儿童结核以及像中描述的涂阴肺结核，传统方法的诊断效能更是大打折扣。

γ-干扰素释放试验（QFT）的技术突破：QFT是一种基于细胞反应的体外检测技术。原理是，当人体感染结核分枝杆菌后，特异性T淋巴细胞在再次接触结核分枝杆菌特异性抗原时会释放γ-干扰素。通过检测血样本在抗原刺激下产生的γ-干扰素水平，即可判断是否存在结核分枝杆菌感染。该方法直接检测反应，不受卡介苗接种和大多数非结核分枝杆菌的影响，较高的特异性，且需单次采血，操作标准化，大大缩短了检测时间。

中国感染数据带来的紧迫性：我国结核高国家之一，数量世界前列，结核防控形势严峻。同时，感染，重症监护室（ICU）的感染率不下，数据显示可达相当比例。此外，细菌耐药问题日益突出，耐药结核分枝杆菌的检出率逐年增长，社区获得性肺炎高，脓毒症死亡率更是严重威胁生命。在这一背景下，快速、准确、可靠的学诊断，如QFT，对于实现感染性早诊断、早治疗、合理用药及遏制耐药传播不可替代的临床价值。

2. 检测与性能

备注：QFT主要用于检测是否存在结核分枝杆菌感染（潜伏性感染和活动性结核），需结合临床表现、影像学检查综合判断是否为活动性结核。

3. 技术原理与流程

QFT的检测过程高度标准化，主要步骤如下：

• 样本采集与处理：采集新鲜肝素抗凝血，立即轻柔混匀。在生物柜，将血分至含结核特异性抗原、阳性（植物血凝素）和阴性（无菌生理盐水）的专用管中。
• 细胞孵育与刺激：将管置于37°C，5% CO2箱中孵育16-24小时，使血液中的特异性T淋巴细胞接受抗原刺激并释放γ-干扰素。
• 血浆分离：孵育结束后，离心分离血浆。
• 联检测：采用联吸附法（ELISA）定量检测各管血浆中γ-干扰素的浓度。
• 结果计算与判读：通过专用的分析软件，计算抗原管与阴性管的γ-干扰素差值，结合阳性值，根据预设的阈值标准（通常为IU/mL）自动判读结果为阳性、阴性或不确定。

4. 适用人群

QFT适用于以下需要进行结核分枝杆菌感染筛查或诊断的人群：

• 不明原因长期发热或发热查：如开头所示，常规检查未能明确。
• 疑似结核但传统检测阴性：涂阴肺结核、肺外结核（如结核性脑膜炎、淋巴结结核、骨结核等）。
• 抑制或低下人群：如HIV、器官移植术后、长期使用抑制剂或肿瘤，结核风险高且临床表现不。
• 抗感染治疗失败或疗效不佳：用于评估是否存在未被识别的结核感染。
• 密切接触筛查与学调查：对活动性结核密切接触进行感染筛查。
• 特殊部位感染需鉴别诊断：如与结节、非结核分枝杆菌等鉴别。

5. 样本采集与送检规范

规范的样本采集与运输是保证QFT结果准确性的前提。

• 样本类型：肝素锂或肝素钠抗凝的静脉血。
• 采集要求：无菌操作采集静脉血，采集后立即轻轻上下颠倒混匀8-10次，防止凝血。严禁剧烈震荡。
• 样本量：需满足每检测管1mL血的要求，通常采集3-4mL。
• 运输与保存：
  • 采集后应尽快（建议8）送至实验室并完成接种孵育。
  • 若不能立即送检，样本应室温（15-25°C）保存，切勿冷藏或冷冻。
  • 运输过程中极端温度（过热或过冷）和剧烈震荡。
• 局限性提示：严重溶血、脂血、凝血或血量不足的样本可能影响检测结果。

6. 在抗感染治疗中的监测价值

QFT用于诊断，在治疗监测中也参考价值。

• 疗效评估的潜在价值：对于活动性结核，治疗有效后，特异性反应水平可能发生变化。但QFT结果（阳性或阴性）不能单独作为治疗有效或治愈的指标，需动态观察并结合临床综合判断。目前不推荐常规用于治疗监测。
• 复检指征：对于初始检测结果为“不确定”，可在排除技术原因（如采血不当、运输延迟、严重抑制等）后，考虑于时进行复检。
• 与耐药监测：QFT本身不检测耐药基因。阳性结果提示感染，但菌株是否耐药仍需依靠传统的药敏试验或分子耐药基因检测。结合，可由QFT快速提示感染，再对阳性样本或分离菌株进行耐药检测，指导精准用药。

7. 报告解读要点

QFT的报告解读需，应始终在临床背景下进行。

• 阳性结果：表示受检存在对结核分枝杆菌特异性抗原的细胞反应，提示很可能感染了结核分枝杆菌（潜伏性感染或活动性结核）。但不能区分潜伏感染与活动。需结合症状、体征、影像学、微生物学等结果综合判断是否为活动性结核，并决定是否启动预防性治疗或抗结核治疗。
• 阴性结果：表示未检测到特异性的细胞反应。在个体中，阴性结果有助于排除结核分枝杆菌感染，但窗口期感染、重症抑制状态（如晚期、血液系统恶性肿瘤）可能导致假阴性。
• 不确定结果：通常是由于阴性值过高或阳性值过低所致，可能原因样本处理不当、个体普遍低下等。应结合临床评估，重新采血检测。
• 重要提示：QFT检测的是状态，而非直接检测体。既往感染过结核并治愈，QFT可能持续阳性。因此，由临床医生结合完整进行解读，切忌脱离临床孤立判读。

综上所述，γ-干扰素释放试验（QFT）作为结核分枝杆菌感染诊断的重要，快速、高特异性、不受卡介苗影响等优势，在弥补传统方法不足、应对我国严峻的结核及感染挑战中发挥着日益的作用。它为临床医生，特别是感染科、呼吸科、重症医学科等领域的医生，提供了有力的诊断武器，助力实现更精准的抗感染治疗。

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